|
|
Pour augmenter les taux de transformation chez les végétaux, il est très important d’obtenir des taux de régénération élevés et d’optimiser les facteurs d’expression transitoire. Nous avons mis au point un protocole de régénération efficace et effectué des expériences d’expression transitoire pour obtenir les données nécessaires à l’amélioration du système de transformation du prunier japonais (Prunus salicina Lindl.) par Agrobacterium tumefaciens. Nous avons évalué cinq variétés différentes de prunier japonais (‘Shiro’, ‘Early Golden’, ‘Gladstone’, ‘Red Heart’ et ‘Bruce’), quatre mélanges de sels de base différents (QL, WPM, B5 et MS), quatre programmes d’éclairage et quatre prétraitements au TDZ dans le but d’optimiser la régénération de pousses adventices. La capacité de régénération variait beaucoup selon la variété utilisée. La composition en sels de base avait un effet significatif sur la fréquence de régénération. Nous avons obtenu les meilleures fréquences de régénération avec la variété ‘Shiro’ (56,4 %) sur mélange QL et avec la variété ‘Early Golden’ (42,8 %) sur mélange B5. Nous avons ensuite effectué des expériences d’expression transitoire à l’aide de trois souches de Agrobacterium tumefaciens, LBA4404, EHA105 et GB3101, contenant le vecteur binaire pCAMBIA2301. Nous avons observé des différences significatives selon la souche de Agrobacterium utilisée. Les souches LBA4404 et EHA105 étaient beaucoup plus efficaces que la souche GV3101, et la présence d’acétosyringone dans le milieu de coculture se traduisait par une augmentation de l’expression du gène GUS.
|
