gus – Übersetzung – Keybot-Wörterbuch

  Assessment of Regenerat...  

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There were significant differences observed among Agrobacterium strains tested. Agrobacterium strains LBA4404 and EHA105 were much more effective than GV3101 strain and the presence of acetosyringone in the co-cultivation medium resulted in increased GUS expression

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Pour augmenter les taux de transformation chez les végétaux, il est très important d’obtenir des taux de régénération élevés et d’optimiser les facteurs d’expression transitoire. Nous avons mis au point un protocole de régénération efficace et effectué des expériences d’expression transitoire pour obtenir les données nécessaires à l’amélioration du système de transformation du prunier japonais (Prunus salicina Lindl.) par Agrobacterium tumefaciens. Nous avons évalué cinq variétés différentes de prunier japonais (‘Shiro’, ‘Early Golden’, ‘Gladstone’, ‘Red Heart’ et ‘Bruce’), quatre mélanges de sels de base différents (QL, WPM, B5 et MS), quatre programmes d’éclairage et quatre prétraitements au TDZ dans le but d’optimiser la régénération de pousses adventices. La capacité de régénération variait beaucoup selon la variété utilisée. La composition en sels de base avait un effet significatif sur la fréquence de régénération. Nous avons obtenu les meilleures fréquences de régénération avec la variété ‘Shiro’ (56,4 %) sur mélange QL et avec la variété ‘Early Golden’ (42,8 %) sur mélange B5. Nous avons ensuite effectué des expériences d’expression transitoire à l’aide de trois souches de Agrobacterium tumefaciens, LBA4404, EHA105 et GB3101, contenant le vecteur binaire pCAMBIA2301. Nous avons observé des différences significatives selon la souche de Agrobacterium utilisée. Les souches LBA4404 et EHA105 étaient beaucoup plus efficaces que la souche GV3101, et la présence d’acétosyringone dans le milieu de coculture se traduisait par une augmentation de l’expression du gène GUS.

  Colonization of geraniu...  

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catenulata strain J1446 were investigated. Although this bio control agent is a soil-inhabiting fungus, treatment of geranium foliage with the agent can reduce grey mould caused by Botrytis cinerea in the greenhouse.

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L’auteur a examiné les besoins écologiques pour la colonisation des feuilles du géranium par l’agent de maitrise biologique, Clonostachys rosea f. catenulata, souche J1446. Bien que cet agent de lutte biologique soit un champignon du sol, le traitement des feuilles de géranium avec cet agent peut réduire la moisissure grise causée par le Botrytis cinerea en serre. Pour caractériser l’étendue de la colonisation foliaire, on a appliqué un isolat du C. rosea gus-tranformé sur le feuillage de deux cultivars de géranium, le Pelargonium × hortorum et le Pelargonium × domesticum. On constate une importance décroissante des populations du C . rosea sur les feuilles sénescentes et sur la tige, suivie par les feuilles pleinement développées, et enfin les feuilles les plus basses nouvellement émergées, chez les deux cultivars. Les températures optimales pour la colonisation des feuilles et des pétioles voisinent les 20-25 °C, chez les deux cultivars. L’agent de maitrise biologique nécessite au moins 12 heures d’humectation continue des feuilles pour l’obtention de densités de population maximales sur les feuilles et les tiges, chez les deux cultivars. Sur la plante entière, on observe une colonisation significativement plus importante sur les feuilles blessées, les tiges et les feuilles sénescentes, comparativement aux feuilles non blessées, aux tiges et aux feuilles matures respectivement. La coloration GUS indique que le champignon colonise préférentiellement les sites de blessures des feuilles et les parties coupées des tiges. Les résultats indiquent que cet agent de maitrise biologique peut coloniser avec succès le feuillage des géraniums, démontrant ainsi la capacité endophytique du C. rosea f. catenulata, dans les racines aussi bien que dans les tissus foliaires.

  Genetic transformation of  

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Embryonic axes of mature seeds were co-cultivated with Agrobacterium strain LBA4404 containing the pC1381 plasmid carrying the hygromycin phosphotranferase gene (hpt) and β-glucuronidase (GUS) gene or with strain EHA105 containing the plasmid pC1301 carrying the same marker and reporter genes.

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L’étude et la mise au point d’une technologie de transformation faisant intervenir de nouvelles stratégies de sélection revêtent beaucoup d’importance pour divers travaux de recherche fondamentale et pour l’amélioration génétique des caractéristiques agronomiques des plantes cultivées. Dans les travaux présentés ici, nous montrons que la résistance à l’hygromycine est un bon système pour la transformation génétique du prunier. Nous avons mis en coculture des tissus prélevés dans l’axe embryonnaire de graines matures avec la souche LBA4404 d’Agrobacterium, renfermant le plasmide pC1381 porteur du gène de l’hygromycine phosphotransférase (hpt) et du gène de la β-glucuronidase (GUS), ou avec la souche EHA105, renfermant le plasmide pC1301 porteur des mêmes gènes marqueur et rapporteur. Cette dernière souche, avec un plasmide pC2301 portant le gène de la néomycine phosphotransférase (nptII) a servi de témoin. Des explants infectés ont été déposés dans du milieu favorisant la croissance des pousses contenant soit 5 mg L-1 d’hygromycine ou 75 mg L-1 de kanamycine à des fins de sélection. Les pousses des explants exposés à l’hygromycine étaient vertes. Après leur transfert dans du milieu à hygromycine neuf, ces pousses ont eu une croissance continue et vigoureuse. À l’analyse par réaction en chaîne de la polymérase avec des amorces hpt et transfert de Southern avec une sonde du gène hpt, la présence des transgènes et leur intégration stable dans les plantes régénérées ont été mises en évidence. Des plantes totalement transgéniques ont été produites en serre. La sélection au moyen de l’hygromycine a donné d’excellents résultats; aucune échappée n’a été trouvée. Ces résultats démontrent que la résistance à l’hygromycine peut être un bon marqueur isolable de la transformation du prunier. Le nouveau système mis au point dans ces travaux est important et est utile pour la transformation multigénique du prunier.

  Translocation of cell-p...  

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

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catenulata strain J1446 were investigated. Although this bio control agent is a soil-inhabiting fungus, treatment of geranium foliage with the agent can reduce grey mould caused by Botrytis cinerea in the greenhouse.

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L’auteur a examiné les besoins écologiques pour la colonisation des feuilles du géranium par l’agent de maitrise biologique, Clonostachys rosea f. catenulata, souche J1446. Bien que cet agent de lutte biologique soit un champignon du sol, le traitement des feuilles de géranium avec cet agent peut réduire la moisissure grise causée par le Botrytis cinerea en serre. Pour caractériser l’étendue de la colonisation foliaire, on a appliqué un isolat du C. rosea gus-tranformé sur le feuillage de deux cultivars de géranium, le Pelargonium × hortorum et le Pelargonium × domesticum. On constate une importance décroissante des populations du C . rosea sur les feuilles sénescentes et sur la tige, suivie par les feuilles pleinement développées, et enfin les feuilles les plus basses nouvellement émergées, chez les deux cultivars. Les températures optimales pour la colonisation des feuilles et des pétioles voisinent les 20-25 °C, chez les deux cultivars. L’agent de maitrise biologique nécessite au moins 12 heures d’humectation continue des feuilles pour l’obtention de densités de population maximales sur les feuilles et les tiges, chez les deux cultivars. Sur la plante entière, on observe une colonisation significativement plus importante sur les feuilles blessées, les tiges et les feuilles sénescentes, comparativement aux feuilles non blessées, aux tiges et aux feuilles matures respectivement. La coloration GUS indique que le champignon colonise préférentiellement les sites de blessures des feuilles et les parties coupées des tiges. Les résultats indiquent que cet agent de maitrise biologique peut coloniser avec succès le feuillage des géraniums, démontrant ainsi la capacité endophytique du C. rosea f. catenulata, dans les racines aussi bien que dans les tissus foliaires.

  Factors influencing col...  

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The biocontrol fungus Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum) strain J1446, commercially available as Prestop® (Verdera Oy, Finland), is an effective antagonist against several root and foliar greenhouse pathogens.

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La souche J1446 du champignon Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum), agent de lutte biologique disponible dans le commerce sous la marque Prestop® (Verdera Oy, Finlande), est un antagoniste efficace contre plusieurs pathogènes racinaires et foliaires des cultures de serre. L’agent de lutte forme de denses réseaux d’hyphes sur les racines de la plante cultivée, pénètre dans les cellules épidermiques et libère des enzymes hydrolytiques, ce qui fait obstacle aux propagules des pathogènes. Or, pour maximiser l’efficacité de ce moyen de lutte, il serait important de savoir quels facteurs liés à l’hôte et à l’environnement influent sur la colonisation des racines par le C. rosea f. catenulata. Nous avons inoculé aux racines de concombres cultivés dans des récipients de solution nutritive les conidies d’une souche de C. rosea f. catenulata transformée par l’introduction du gène codant l’enzyme GUS. Nous avons suivi l’évolution dans le temps des populations associées aux racines, au moyen de dénombrements des colonies sur plaque, d’une coloration spécifique à la GUS et d’épreuves enzymatiques servant à mesurer l’activité de la GUS. Des facteurs tels que le pH, la température et le milieu de croissance ont influé de manière importante sur la densité des populations, tandis que le cultivar de concombre, l’apport de nutriments et la pratique de lésions sur les racines n’ont pas semblé avoir d’effet significatif sur le taux de colonisation. La densité de la population de C. rosea f. catenulata présente sur les racines était maximale lorsque la solution nutritive était maintenue à un pH de 5, 6 ou 7 et à une température de 18 à 22 °C. Les taux de colonisation les plus faibles ont été observés sur les racines des sujets cultivés dans de la terre à rempoter ou dans de la terre prélevée au champ. La mesure de l’activité de la GUS a fourni une évaluation légèrement plus exacte du taux de colonisation des racines que le dénombrement des colonies sur plaque. Nos résultats permettent d’établir quelles conditions environnementales assurent une colonisation maximale des racines par le C. rosea f. catenulata et une efficacité optimale de cet agent de lutte biologique.

  Factors influencing col...  

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The biocontrol fungus Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum) strain J1446, commercially available as Prestop® (Verdera Oy, Finland), is an effective antagonist against several root and foliar greenhouse pathogens.

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La souche J1446 du champignon Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum), agent de lutte biologique disponible dans le commerce sous la marque Prestop® (Verdera Oy, Finlande), est un antagoniste efficace contre plusieurs pathogènes racinaires et foliaires des cultures de serre. L’agent de lutte forme de denses réseaux d’hyphes sur les racines de la plante cultivée, pénètre dans les cellules épidermiques et libère des enzymes hydrolytiques, ce qui fait obstacle aux propagules des pathogènes. Or, pour maximiser l’efficacité de ce moyen de lutte, il serait important de savoir quels facteurs liés à l’hôte et à l’environnement influent sur la colonisation des racines par le C. rosea f. catenulata. Nous avons inoculé aux racines de concombres cultivés dans des récipients de solution nutritive les conidies d’une souche de C. rosea f. catenulata transformée par l’introduction du gène codant l’enzyme GUS. Nous avons suivi l’évolution dans le temps des populations associées aux racines, au moyen de dénombrements des colonies sur plaque, d’une coloration spécifique à la GUS et d’épreuves enzymatiques servant à mesurer l’activité de la GUS. Des facteurs tels que le pH, la température et le milieu de croissance ont influé de manière importante sur la densité des populations, tandis que le cultivar de concombre, l’apport de nutriments et la pratique de lésions sur les racines n’ont pas semblé avoir d’effet significatif sur le taux de colonisation. La densité de la population de C. rosea f. catenulata présente sur les racines était maximale lorsque la solution nutritive était maintenue à un pH de 5, 6 ou 7 et à une température de 18 à 22 °C. Les taux de colonisation les plus faibles ont été observés sur les racines des sujets cultivés dans de la terre à rempoter ou dans de la terre prélevée au champ. La mesure de l’activité de la GUS a fourni une évaluation légèrement plus exacte du taux de colonisation des racines que le dénombrement des colonies sur plaque. Nos résultats permettent d’établir quelles conditions environnementales assurent une colonisation maximale des racines par le C. rosea f. catenulata et une efficacité optimale de cet agent de lutte biologique.

  Differential expression...  

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Some unique and several common TFBSs were identified in CHS7 and CHS8 promoters. We cloned β-glucuronidase (GUS) under CHS7 and CHS8 promoters and monitored the tissue-specific GUS expression in transformed Arabidopsis.

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La chalcone synthase (CHS) catalyse la première réaction propre à la biosynthèse des flavonoïdes et des isoflavonoïdes. Le génome du soja contient neuf copies des gènes de la CHS (CHS1-CHS9) et une double copie du gène CHS1. Bien que les membres de la famille génique de la CHS du soja aient une séquence très semblable, ils jouent des rôles différents durant le développement de la plante ou en réponse à des stimuli du milieu. Nos travaux précédents, qui comparaient l’expression génique globale chez deux cultivars de soja différant par leur taux d’accumulation d’isoflavonoïdes totaux, ont souligné la participation des gènes CHS7 et CHS8 dans la synthèse des isoflavonoïdes. Nous avons poursuivi nos travaux visant à mieux comprendre les profils d’expression de ces deux gènes chez le soja et chez Arabidopsis transgénique. Nous avons isolé les régions promotrices des gènes CHS7 et CHS8 et les avons analysées in silico pour étudier les éventuels sites de liaison de facteurs de transcription (TFBS). Nous avons vérifié les TFBS par la technique de l’empreinte à l’ADNase I. Nous avons détecté certains TFBS uniques et plusieurs TFBS communs chez les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8. Nous avons cloné le gène de la β-glucuronidase (GUS) contrôlé par les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 et nous avons mesuré l’expression du gène GUS spécifique à chaque tissu chez Arabidopsis transformé. Nous avons observé des activités différentes du gène GUS dans les jeunes feuilles, les racines et la paroi des gousses matures des plants transgéniques GUS avec promoteur du gène CHS7 et GUS avec promoteur du gène CHS8. Nous avons déterminé les profils d’expression spécifiques à chaque tissu des gènes CHS7 et CHS8 chez le soja par RT-PCR quantitative. Les gènes CHS7 et CHS8 étaient tous deux exprimés davantage dans les racines, mais les profils d’expression globale de ces gènes variaient d’un tissu à l’autre. Les résultats indiquent que la diversité structurale des promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 peut entraîner une activation différente de ces gènes par différents inducteurs et un niveau d’expression différent de ces gènes selon le stade de développement et le tissu.

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We demonstrated that Tat (RKKRRQRRR) and Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR) are able to efficiently transduce GUS enzyme (272 kDa) in its functional form in 5 and 14% of the microspores, respectively, in a noncovalent manner.

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La culture de microspores apporte une contribution importante aux travaux de sélection visant à améliorer les plantes cultivées et notamment les céréales. Nous avons à cet égard étudié l’internalisation de divers peptides de pénétration cellulaire, le Tat, le Tat2, le M-Tat, le pVEC (peptide vascular endothelial-cadherin) et le transportan, marqués par fluorescence, dans des microspores de triticale fraîchement isolées (au stade uninucléé moyen-avancé). Nous avons ainsi pu constater une transduction efficiente de la forme fonctionnelle de l’enzyme GUS (272 kDa) dans 5 % des microspores par le Tat (RKKRRQRRR) et dans 14 % par le Tat2 (RKKRRQRRRRKKRRQRRR); cette transduction s’opérait de manière non covalente. Dans le cas du Pep-1, peptide de pénétration cellulaire synthétique, nous avons constaté une transduction de la forme active de la GUS dans 31 % des microspores. Nous avons également étudié l’effet de divers inhibiteurs de l’endocytose et de la macropinocytose sur la transduction de la GUS par le Tat2, et nous avons observé que la pénétration par micropinocytose était privilégiée. Une épreuve de protection par l’ADNase I et un examen par microscopie confocale à balayage laser nous ont permis de recommander une proportion de 4 parts de Tat2 pour une d’ADN de plasmide linéarisé (pActGUS) dans les préparations complexes servant à la transfection de gènes dans les microspores. Nous avons aussi constaté que le Tat2 permet la transfection du gène GUS dans près de 2 % des microspores de triticale. Le Tat muté (M-Tat, AKKRRQRRR) utilisé comme témoin négatif n’a pas permis la transduction de la protéine GUS ni la transfection du gène GUS dans le noyau des microspores. Nos résultats montrent que les peptides de pénétration cellulaire peuvent faire pénétrer des macromolécules telles que protéines ou ADN de plasmide linéarisé, de manière non covalente, dans les microspores isolées de triticale. Ces peptides permettraient de mettre au point pour les végétaux des technologies simples, rapides et rentables de génie génétique.

  Differential expression...  

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Some unique and several common TFBSs were identified in CHS7 and CHS8 promoters. We cloned β-glucuronidase (GUS) under CHS7 and CHS8 promoters and monitored the tissue-specific GUS expression in transformed Arabidopsis.

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La chalcone synthase (CHS) catalyse la première réaction propre à la biosynthèse des flavonoïdes et des isoflavonoïdes. Le génome du soja contient neuf copies des gènes de la CHS (CHS1-CHS9) et une double copie du gène CHS1. Bien que les membres de la famille génique de la CHS du soja aient une séquence très semblable, ils jouent des rôles différents durant le développement de la plante ou en réponse à des stimuli du milieu. Nos travaux précédents, qui comparaient l’expression génique globale chez deux cultivars de soja différant par leur taux d’accumulation d’isoflavonoïdes totaux, ont souligné la participation des gènes CHS7 et CHS8 dans la synthèse des isoflavonoïdes. Nous avons poursuivi nos travaux visant à mieux comprendre les profils d’expression de ces deux gènes chez le soja et chez Arabidopsis transgénique. Nous avons isolé les régions promotrices des gènes CHS7 et CHS8 et les avons analysées in silico pour étudier les éventuels sites de liaison de facteurs de transcription (TFBS). Nous avons vérifié les TFBS par la technique de l’empreinte à l’ADNase I. Nous avons détecté certains TFBS uniques et plusieurs TFBS communs chez les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8. Nous avons cloné le gène de la β-glucuronidase (GUS) contrôlé par les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 et nous avons mesuré l’expression du gène GUS spécifique à chaque tissu chez Arabidopsis transformé. Nous avons observé des activités différentes du gène GUS dans les jeunes feuilles, les racines et la paroi des gousses matures des plants transgéniques GUS avec promoteur du gène CHS7 et GUS avec promoteur du gène CHS8. Nous avons déterminé les profils d’expression spécifiques à chaque tissu des gènes CHS7 et CHS8 chez le soja par RT-PCR quantitative. Les gènes CHS7 et CHS8 étaient tous deux exprimés davantage dans les racines, mais les profils d’expression globale de ces gènes variaient d’un tissu à l’autre. Les résultats indiquent que la diversité structurale des promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 peut entraîner une activation différente de ces gènes par différents inducteurs et un niveau d’expression différent de ces gènes selon le stade de développement et le tissu.

  Factors influencing col...  

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The biocontrol fungus Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum) strain J1446, commercially available as Prestop® (Verdera Oy, Finland), is an effective antagonist against several root and foliar greenhouse pathogens.

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La souche J1446 du champignon Clonostachys rosea f. catenulata (Gliocladium catenulatum), agent de lutte biologique disponible dans le commerce sous la marque Prestop® (Verdera Oy, Finlande), est un antagoniste efficace contre plusieurs pathogènes racinaires et foliaires des cultures de serre. L’agent de lutte forme de denses réseaux d’hyphes sur les racines de la plante cultivée, pénètre dans les cellules épidermiques et libère des enzymes hydrolytiques, ce qui fait obstacle aux propagules des pathogènes. Or, pour maximiser l’efficacité de ce moyen de lutte, il serait important de savoir quels facteurs liés à l’hôte et à l’environnement influent sur la colonisation des racines par le C. rosea f. catenulata. Nous avons inoculé aux racines de concombres cultivés dans des récipients de solution nutritive les conidies d’une souche de C. rosea f. catenulata transformée par l’introduction du gène codant l’enzyme GUS. Nous avons suivi l’évolution dans le temps des populations associées aux racines, au moyen de dénombrements des colonies sur plaque, d’une coloration spécifique à la GUS et d’épreuves enzymatiques servant à mesurer l’activité de la GUS. Des facteurs tels que le pH, la température et le milieu de croissance ont influé de manière importante sur la densité des populations, tandis que le cultivar de concombre, l’apport de nutriments et la pratique de lésions sur les racines n’ont pas semblé avoir d’effet significatif sur le taux de colonisation. La densité de la population de C. rosea f. catenulata présente sur les racines était maximale lorsque la solution nutritive était maintenue à un pH de 5, 6 ou 7 et à une température de 18 à 22 °C. Les taux de colonisation les plus faibles ont été observés sur les racines des sujets cultivés dans de la terre à rempoter ou dans de la terre prélevée au champ. La mesure de l’activité de la GUS a fourni une évaluation légèrement plus exacte du taux de colonisation des racines que le dénombrement des colonies sur plaque. Nos résultats permettent d’établir quelles conditions environnementales assurent une colonisation maximale des racines par le C. rosea f. catenulata et une efficacité optimale de cet agent de lutte biologique.

  Differential expression...  

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Some unique and several common TFBSs were identified in CHS7 and CHS8 promoters. We cloned β-glucuronidase (GUS) under CHS7 and CHS8 promoters and monitored the tissue-specific GUS expression in transformed Arabidopsis.

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La chalcone synthase (CHS) catalyse la première réaction propre à la biosynthèse des flavonoïdes et des isoflavonoïdes. Le génome du soja contient neuf copies des gènes de la CHS (CHS1-CHS9) et une double copie du gène CHS1. Bien que les membres de la famille génique de la CHS du soja aient une séquence très semblable, ils jouent des rôles différents durant le développement de la plante ou en réponse à des stimuli du milieu. Nos travaux précédents, qui comparaient l’expression génique globale chez deux cultivars de soja différant par leur taux d’accumulation d’isoflavonoïdes totaux, ont souligné la participation des gènes CHS7 et CHS8 dans la synthèse des isoflavonoïdes. Nous avons poursuivi nos travaux visant à mieux comprendre les profils d’expression de ces deux gènes chez le soja et chez Arabidopsis transgénique. Nous avons isolé les régions promotrices des gènes CHS7 et CHS8 et les avons analysées in silico pour étudier les éventuels sites de liaison de facteurs de transcription (TFBS). Nous avons vérifié les TFBS par la technique de l’empreinte à l’ADNase I. Nous avons détecté certains TFBS uniques et plusieurs TFBS communs chez les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8. Nous avons cloné le gène de la β-glucuronidase (GUS) contrôlé par les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 et nous avons mesuré l’expression du gène GUS spécifique à chaque tissu chez Arabidopsis transformé. Nous avons observé des activités différentes du gène GUS dans les jeunes feuilles, les racines et la paroi des gousses matures des plants transgéniques GUS avec promoteur du gène CHS7 et GUS avec promoteur du gène CHS8. Nous avons déterminé les profils d’expression spécifiques à chaque tissu des gènes CHS7 et CHS8 chez le soja par RT-PCR quantitative. Les gènes CHS7 et CHS8 étaient tous deux exprimés davantage dans les racines, mais les profils d’expression globale de ces gènes variaient d’un tissu à l’autre. Les résultats indiquent que la diversité structurale des promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 peut entraîner une activation différente de ces gènes par différents inducteurs et un niveau d’expression différent de ces gènes selon le stade de développement et le tissu.

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La chalcone synthase (CHS) catalyse la première réaction propre à la biosynthèse des flavonoïdes et des isoflavonoïdes. Le génome du soja contient neuf copies des gènes de la CHS (CHS1-CHS9) et une double copie du gène CHS1. Bien que les membres de la famille génique de la CHS du soja aient une séquence très semblable, ils jouent des rôles différents durant le développement de la plante ou en réponse à des stimuli du milieu. Nos travaux précédents, qui comparaient l’expression génique globale chez deux cultivars de soja différant par leur taux d’accumulation d’isoflavonoïdes totaux, ont souligné la participation des gènes CHS7 et CHS8 dans la synthèse des isoflavonoïdes. Nous avons poursuivi nos travaux visant à mieux comprendre les profils d’expression de ces deux gènes chez le soja et chez Arabidopsis transgénique. Nous avons isolé les régions promotrices des gènes CHS7 et CHS8 et les avons analysées in silico pour étudier les éventuels sites de liaison de facteurs de transcription (TFBS). Nous avons vérifié les TFBS par la technique de l’empreinte à l’ADNase I. Nous avons détecté certains TFBS uniques et plusieurs TFBS communs chez les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8. Nous avons cloné le gène de la β-glucuronidase (GUS) contrôlé par les promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 et nous avons mesuré l’expression du gène GUS spécifique à chaque tissu chez Arabidopsis transformé. Nous avons observé des activités différentes du gène GUS dans les jeunes feuilles, les racines et la paroi des gousses matures des plants transgéniques GUS avec promoteur du gène CHS7 et GUS avec promoteur du gène CHS8. Nous avons déterminé les profils d’expression spécifiques à chaque tissu des gènes CHS7 et CHS8 chez le soja par RT-PCR quantitative. Les gènes CHS7 et CHS8 étaient tous deux exprimés davantage dans les racines, mais les profils d’expression globale de ces gènes variaient d’un tissu à l’autre. Les résultats indiquent que la diversité structurale des promoteurs des gènes CHS7 et CHS8 peut entraîner une activation différente de ces gènes par différents inducteurs et un niveau d’expression différent de ces gènes selon le stade de développement et le tissu.

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