|
|
DNA replication and transcription of NeabNPV, the nucleopolyhedrovirus (NPV) of the balsam fir sawfly, Neodiprion abietis (Hymenoptera: Diprionidae), in host larvae were investigated. NPV DNA replication kinetics and gene-expression patterns have been resolved only in lepidopteran cell-culture systems and in limited in vivo experiments with lepidopteran larvae. Furthermore, there are significant differences in pathologies caused by lepidopteran NPVs, which replicate in many tissues, and hymenopteran NPVs, known to replicate in midgut epithelium only. Despite the differences in host specificity and pathology, NeabNPV DNA replication kinetics were similar to those reported for lepidopteran NPVs. Maximal NeabNPV DNA synthesis was observed between 4 and 24 h post-inoculation (p.i.) but, in contrast to lepidopteran NPVs, synthesis continued at a lower rate up to 72 h p.i. Selected NeabNPV genes exhibited a cascade pattern of transcription similar to that of lepidopteran NPVs. RT-PCR products of the NeabNPV lef-1, lef-2 and dnapol transcripts were observed as early as 2 h p.i., whilst lef-8 and lef-9, encoding putative viral RNA polymerase subunits, were detected at 1 and 6 h p.i., respectively. Two structural late transcripts (gp41 and p 74) were observed from 6 h p.i. The very late factor 1 (vlf-1) transcript, a transactivator of very late genes, was observed from 12 h p.i., but the very late transcript polh, ecoding the major occlusion protein, polyhedrin, ws observed from 24 h p.i. This study provides the first insight into DNA replication and gene expression of a non-lepidopteran baculovirus.
|
|
|
Nous avons étudié la réplication et la transcription de l'ADN du virus NeabNPV, un nucléopolyhédrovirus du diprion du sapin, Neodiprion abietis (Hymenoptera : Diprionidae), chez les larves de l'insecte. La cinétique de réplication de l'ADN du nucléopolyhédrovirus (NPV) et les profils d'expression génique n'ont été étudiés que dans les systèmes de culture de cellules de lépidoptères et dans quelques expériences in vivo chez des larves de lépidoptères. Il existe en outre des différences importantes dans les pathologies causées par les NPV de lépidoptères, qui se multiplient dans de nombreux tissus, et les NPV d'hyménoptères, qui ne se multiplient que dans l'épithélium de l'intestin moyen. Malgré des différences dans la pathologie et la spécificité de l'hôte, la cinétique de réplication de l'ADN du NeabNPV est semblable à celle élucidée chez les NPV de lépidoptères. Chez le NeabNPV, la synthèse maximale d'ADN a été observée entre 4 et 24 heures (h) après l'inoculation (p.i., pour post-inoculation), mais contrairement à ce qui a été signalé chez les NPV de lépidoptères, la synthèse s'est poursuivie, bien qu'à un rythme plus lent, jusqu'à 72 h p.i. On a observé, pour des gènes déterminés du NeabNPV, un profil de transcription en cascade semblable à celui des NPV de lépidoptères. Avec les transcrits lef-1, lef-2 et dnapol du NeabNPV, on a observé des produits de RT-PCR aussi tôt que 2 h p.i., tandis qu'avec les transcrits lef-8 et lef-9, codant les présumées sous-unités de l'ARN polymérase virale, les produits de RT-PCR ont été détectés 1 h et 6 h p.i., respectivement. Deux transcrits de structure tardifs (gp41 et gp74) ont été observés à partir de 6 h p.i. Le transcrit très tardif du facteur 1 (vlf-1), un transactivateur de gènes très tardifs, a été observé à partir de 12 h p.i., mais le transcrit très tardif polh, codant la polyhédrine, principale protéine des corps d'occlusion, a été observé à partir de 24 h p.i. Cette étude fournit les premières données sur la réplication de l'ADN et l'expression des gènes chez un baculovirus de non-lépidoptères.
|
