dtt – Traduction – Dictionnaire Keybot

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  How To Use Hielscher’s ...  
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Finally, the pellets were dissolved with 0.5 mL of buffer containing 40 mM tris base, 5 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 100 mM DTT, 0.5% (v/v) biolyte 3-10 (LB3), and were sonicated and centrifuged at 12,000 g for 20 min.
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Die Pellets wurden gewaschen und 5 Min. mit weiteren 0,5 mL LB2 beschallt und anschließend mit 12.000g für 20 Min. zentrifugiert. Der zwei Fraktionen des Überstands wurden gesammelt. zuletzt wurden die Pellets mit 0,5 mL Puffer - bestehend aus 40 mM Tris-Base, 5 M Harnstoff, 2 M Thioharnstoff, 4 % CHAPS, 100 mM DVB-t, 0,5 % (V/V) Biolyte 3-10 (LB3) - gelöst, mit Ultraschall behandelt und für 20 Min. mit 12.000g zentrifugiert.
  Ultrasonic Lysis of E. ...  
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The E. coli pellet was sonicated with an ultrasonic system UP100H (Hielscher). For this purpose, cell pellet was resuspended in chilled lysis buffer (50 mM Tris-HCl pH=7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) and cooled on ice for 10 min.
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Das E. coli-Pellet wurde mit einem Ultraschallsystem UP100H (Hielscher) beschallt. Hierfür wurde das Zellpellet in gekühlter Pufferlösung (50 mM Tris-HCl pH=7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) resuspendiert und für 10 Min. auf Eis gekühlt. Anschließend wurde die Zellsuspension mit jeweils 10 kurzen Ultraschallimpulsen beschallt, welche von 30-sekündigen Pausen unterbrochen wurden, in denen die Probe abkühlen konnte. Anschließend wurde die Zelltrümmer durch Zentrifugieren bei 14.000rpm, 4°C und 15 Min. abgetrennt und anschließend für 10 Min. auf Eis gekühlt. Für die rPR-Expression wurde der Überstand auf 12% Polyacrylamidgel geladen und mittels SDS-PAGE und Western Blot analysiert. Die rPR-Reinigung erfolgte mit Ni2 -NTA (Invitrogen, USA). Auf dieser Stufe wurde die native Reinigung angewendet. Der Reinheitsgrad der gereinigten Proteine wurde durch Elektrophorese auf 12% Polyacrylamidgel und anschließender Coomassie-Blue-Färbung bewertet. Die Proteinkonzentration wurde mittels Micro BCA Proteinassay Kit (PIERCE, USA) gemessen. (Azarnezhad et al. 2016)